時間：2022-12-28 12:43:49
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【摘要】目的 評價貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測甲狀腺激素的效果。方法 測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分別計算批內(nèi)精密度、批間精密度、回收率和線性范圍。結(jié)果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批內(nèi)精密度分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批間精密度分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,線性范圍分別為0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。結(jié)論 貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)測定甲狀腺功能具有重復性好、準確度高、可報告范圍寬、測定速度快等優(yōu)點,適合于臨床應用。
【關(guān)鍵詞】化學發(fā)光免疫分析法;甲狀腺激素
化學發(fā)光免疫分析法是20世紀80年代以來發(fā)展起來的一項新的標記免疫技術(shù),在臨床上有廣泛的應用,包括內(nèi)分泌激素、腫瘤標志物、血藥濃度、傳染病、心血管疾病標志物、貧血及過敏原等,特別是在甲狀腺激素檢測中應用更為廣泛[1]。本文采用貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測T3、T4、FT3、FT4、TSH,對其方法學進行綜合評價。
1 材料與方法
1.1 儀器貝克曼全自動化學發(fā)光免疫分析儀。
1.2 試劑發(fā)光試劑、質(zhì)控品、標準品由貝克曼公司提供。
1.3 血清來源試驗所需血清樣本采自本院門診和住院患者,每例取3ml血,離心3000 r/min,10分鐘,取血清-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 檢測方法利用化學發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗夾心法、競爭法相似,嚴格按試劑盒操作說明書操作。
1.5 評價指標
1.5.1 批內(nèi)精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本,每種濃度同批平行測定10次,計算平均變異系數(shù)(CV)。
1.5.2 批間精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本各10份,每天各測定1次,共測定10天,計算平均變異系數(shù)(CV)。
1.5.3回收率:由貝克曼公司提供原裝3個濃度的標準品,分別測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每個濃度平行測定3次,計算平均回收率。
1.5.4 線性范圍收集患者血清標本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH濃度高于廠家提供線性范圍上限作為高值濃度水平(H),廠家提供稀釋液作為低值濃度水平(L),用稀釋液稀釋高值濃度血清,形成如下系列濃度檢測標本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列濃度標本平行測定各項指標含量,取平均值作圖,取在坐標紙上呈明顯直線趨勢的各點值進行直線回歸統(tǒng)計,取回歸系數(shù)r大于0.9的濃度范圍為可報告的濃度線性范圍。
2 結(jié) 果
2.1 批內(nèi)精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批間精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 線性范圍T3所測結(jié)果得到回歸方程為y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距經(jīng)t檢驗,ta=1.36,0.95,截距經(jīng)t檢驗,ta=0.36,
3 討 論
血清中三碘甲狀原腺氨酸(T3)、四碘甲狀原腺氨酸(T4)、游離三碘甲狀原腺氨酸(FT3)、游離四碘甲狀原腺氨酸(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)的測定對甲狀腺疾病的診斷具有重要價值。以往國內(nèi)實驗室多采用RIA、MIRA檢測血清甲狀腺激素水平,此法雖較準確,儀器與試劑也較為低廉,但對操作人員水平要求較高,對實驗條件及環(huán)境有較多要求,且隨著標記抗原的放射性衰減,而使計數(shù)不穩(wěn)定及曲線失真,導致結(jié)果偏離,結(jié)果重復性差,且可產(chǎn)生放射性污染[2,4]。
近年來發(fā)展起來的全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是利用化學發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗體夾心法、競爭法相似。其優(yōu)點是[3,5]:(1)成熟的單克隆抗體技術(shù)或獨特的磁性微粒子技術(shù),保證了反應的高特異性;(2)檢測范圍寬,具有良好的稀釋線性;(3)試劑穩(wěn)定性好,不需酶促反應,有效期可長達半年;(4)操作簡便,分析過程采用全自動化,減少了人工操作誤差,重復性好;(5)試劑及標本均采用無吸附材料,故相互間的交叉污染率低,干擾因素少;(6)真正的隨機連續(xù)檢測,樣本隨到隨測,具有急診優(yōu)先插入功能。因此全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是目前檢測甲狀腺激素等指標的較好方法。
【參考文獻】
[1] 陶義訓.免疫學和免疫學檢驗[M].第1版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:174.
[2] 葉任高,陸再英.內(nèi)科學[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:725.
[3] 羅煒,王慧,陳柏銘.化學發(fā)光免疫法與放射免疫法測定血清AFP的比較[J].上海醫(yī)學檢驗雜志,2000,15(3):149.
本文闡述在ARCHITECTi2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀應用實踐中進行使用方法的改良，極大地方便了儀器操作者的使用，有效地避免了使用過程中的差錯的發(fā)生。解決故障的過程有助于思路的擴展，對使用其他的檢驗儀器有很好的啟發(fā)作用和較大的參考或應用價值。
關(guān)鍵詞：全自動化學發(fā)光免疫分析儀；標本容易加錯現(xiàn)象；標本識別移位故障；改良方案
【中圖分類號】
R249 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）07-0272-01
Architect i2000SR全自動免疫分析儀是由美國雅培公司研發(fā)的第三代大型全自動免疫分析儀，采用化學發(fā)光的原理進行檢測，具有較高的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性，具有檢測速度快，測量范圍寬廣等諸多優(yōu)點，且可與生化模塊C8000相連。且檢測試劑穩(wěn)定并易于進行室內(nèi)與室間質(zhì)量控制。然而全自動化儀器的高故障率亦對檢驗技術(shù)人員提出了更高標準的要求。本文即是作者在雅培i2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀應用實踐中遇到的：容易出現(xiàn)加錯標本，和機器本身出現(xiàn)標本識別移位的故障現(xiàn)象，分析其原因、探討改造方案并付諸實踐成功解決故障的過程，以便應用到其他的現(xiàn)代化的檢驗設備使用中去。
1 標本容易加錯的改良方案
1.1 標本容易加錯的現(xiàn)象：
由于該機器的原來的設計是每個標本架只有5個孔，也就是每個標本架只能放置5個標本，這樣就使使用者放置標本時，必須要好好的記著所加標本的原來的編號，待放到架子上時要好好的計算出標本的位置是在第幾個架子、第幾號位置編號。譬如：手里拿著16號標本需要放置到標本架子上時，就必須計算出是第4個架子的第1號位置才是16號的位置。是非常的不方便吧？
1.2 標本容易加錯現(xiàn)象的解決方案：
因為我發(fā)現(xiàn)了這個非常不容易計算出所要加的標本位置，并且又很容易加錯標本，工作起來非常不方便的現(xiàn)象時，就一直在腦子里尋求一個解決這個問題的方案。
不久我就想出來了個解決的辦法：那就是在每個標本架的靠近1號位置端，設計出了一個不干膠貼，上端標明1、2、3、4……架子號順序號，下端標明該架子的5個標本號在該架子上的應有的順序范圍。詳見附圖1改造后的第一個托盤俯視圖
2 標本識別移位故障的改良方案
2.1 故障現(xiàn)象：
應用ARCHITECTi2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀進行批量編程，每個標本架放置5個標本，每5個標本架為一組，每一組用一個托盤托起，即標本號依次為1-25、26-50、51-75、76-100四組。在全部標本儀器檢測完成后，對HBsAg陽性標本利用金標法復查時，偶然發(fā)現(xiàn)陰陽性結(jié)果極為不符合的現(xiàn)象。遂對每個標本對應的架號、位置、結(jié)果逐一排查，發(fā)現(xiàn)個別標本架上的標本并沒有消耗（即沒有被取樣），但卻賦上了數(shù)值。經(jīng)逐一檢查儀器所加樣本與操作者編程的標本架號位置明顯不同，即發(fā)生了跳躍，如31號標本所賦值實為36號樣本測試值或其它樣本值。
2.2 故障分析：
經(jīng)與使用ARCHITECTi2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀的兄弟單位工作人員及雅培中國工程師溝通，了解其工作過程原理是：利用ARCHITECTi2000SR化學發(fā)光免疫分析儀批量編程1-25、26-50、51-75、76-100號標本架號位置后，儀器會首先會進行標本架條碼掃描，同時也給每個標本進行掃描。如果某個標本架的條碼沒有掃描到，則機器會自動順延一個標本架進行操作，這樣就會出現(xiàn)跳架移位現(xiàn)象，也就是我們上述的故障現(xiàn)象。譬如儀器在批量編程，31-35號標本架的條碼掃描過程中沒有掃到，儀器則默認該架子不存在，標本也不存在，跳過了該標本架，將36-40號標本架或及其它標本架上的標本默認為31-35號標本。以后的標本均以同樣的方法順延賦值，即后面的所有標本均順延了5個號碼，如不復查而直接報告?zhèn)鬏數(shù)慕Y(jié)果，必然出現(xiàn)張冠李戴的嚴重后果。上述現(xiàn)象并非偶然，隨著工作量的增加，出現(xiàn)的頻率越來越高，為日常檢驗工作帶來相當大的不便，工作人員往往會花費很大的時間和精力，去排查或復查標本與結(jié)果是否相符，一度認為此儀器的標本識別和處理軟件系統(tǒng)存在巨大缺陷。
3 標本識別移位故障的解決方案
通過細致的觀察分析、嚴密的科學探討和積極的創(chuàng)新實踐，我們對ARCHIT -ECT i2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀的進樣系統(tǒng)，進行了簡單而合理的改良，使上述故障得以完全解決。具體方法如下：
準備100個改造過的與架同高的平口空試管（以合適放置加樣杯為宜），利用條碼機打印1-100編號號碼的條碼，分別貼在每個試管上條碼器能夠掃描到的位置。將這些貼有條碼的試管按順序放置在標本架上，并保持條碼向外，易于條碼系統(tǒng)識別判讀；實驗操作時只需將加樣杯放置在對應貼有條碼的試管上即可。請注意：只需更換加樣杯加病人血清標本。更多的標本亦可用類似方法粘貼上1-100或更多的試管條碼。
詳見附圖1 圖2所改造的H540試管架俯視圖和側(cè)視圖
經(jīng)過如此改良，儀器在進行標本架條碼掃描時，同時也會給每個試管條碼進行掃描，如果其中某個標本架條碼漏掃，但仍會掃描到試管上的條碼號，機器則自動的默認標本架的存在，就不會出現(xiàn)跳架移位的現(xiàn)象。
4 思路擴展與推廣應用
標本容易加錯的解決方案：就是以較小的改造或改良，而改變了原來的設計的不足，避免了工作中容易出現(xiàn)的錯誤。像這種小的改造可以用到大多數(shù)的試管架子是5個試管位置的大型生化分析儀、放免分析儀等的儀器上。
標本識別移位故障的解決方案：類似的跳架移位故障，不僅出現(xiàn)在ARCHIT -ECTi2000SR全自動化學發(fā)光免疫分析儀上，在其它設備上，譬如ARCHITEC -Ti4000SR等儀器亦會出現(xiàn)，亦可采用此法進行改造或改良。兄弟單位同類儀器或不同品牌的儀器，出現(xiàn)類似的因為批編程而出現(xiàn)的跳架移位故障亦可借鑒此方法一試，以避免出現(xiàn)數(shù)據(jù)移位錯誤，為臨床提供準確的檢驗信息。
【關(guān)鍵詞】 ARCHITECT—i2000SR；梅毒螺旋體特異性抗體；性能評價
i2000SR運用的是化學發(fā)光微粒子免疫檢測法，它能對多項免疫項目進行定性或定量分析。由于在不同的運行環(huán)境下相同儀器有可能出現(xiàn)性能差異，本科新儀器投入臨床使用前要對該儀器檢測系統(tǒng)中的進行性能評價。
1 材 料
1.1 儀器 ARCHITECT—i2000SR全自動免疫分析儀。
1.2 試劑 原裝配套試劑盒。
1.3 標本 2012年本院的住院或健康體檢者。
2 方 法
2.1 空白實驗 使用PBS作為樣本測定三次，記錄結(jié)果。
2.2 精密度 ①日間精密度：使用高、中、低質(zhì)控品連續(xù)測定15天，計算CV值。②批內(nèi)精密度：使用高、中、低3個水平的血清重復測定15次，計算CV值。
2.3 線性范圍 收集略高于線性范圍下限的低值血清（L）和略低于線性范圍上限的高值血清（H），按5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L梯度進行混合并檢測1，對不同濃度的實測值與預測值進行線性回歸分析。
2.4 污染攜帶率 先取一份H值標本，連續(xù)測定3次，隨后立即取一份L值標本連續(xù)測定3次：攜帶污染率=（L1—L3）/（H3—L3）×100%。
2.5 參考區(qū)間驗證 按照NCCLS2推薦的要求進行驗證，選擇經(jīng)體檢排除其他疾病的正常血清標本男女性標本各20名，觀察檢測結(jié)果是否在參考范圍內(nèi)。
3 結(jié) 果
3.1 精密度試驗結(jié)果 高、中、低3個水平血清的批內(nèi)精密度CV分別為5.54%、7.04%和3.54%，用廠家配套低、高水平質(zhì)控品測定結(jié)果的批間精密度CV分別為8.92%及6.69%，均小于10%。
3.2 空白試驗結(jié)果 PBS三次結(jié)果分別為0.01、0.02和0.01。
3.3 線性試驗結(jié)果 Y=0.9963X+0.0029，相關(guān)系數(shù)R2=0.9965。由結(jié)果可知，儀器的線性良好，達到說明書的要求。
3.4 攜帶污染率 攜帶污染率為0.29%
3.5 參考區(qū)間驗證 經(jīng)過驗證，檢測值均落在廠家給定的參考范圍之內(nèi)，符合率為100%。
4 討 論
近年來全自動免疫化學發(fā)光儀在梅毒特異性抗體定量檢測中的應用逐漸受到重視，i2000SR采用微粒子化學發(fā)光免疫技術(shù)定量測定梅毒特異性抗體。為保證檢驗質(zhì)量，實驗室對新裝的儀器在用于檢測臨床標本前都應該要做性能評價。通過性能評價發(fā)現(xiàn)，該儀器檢測梅毒螺旋體特異性抗體的空白試驗良好；批內(nèi)精密度和日間精密度均小于10%，試驗表明儀器測定結(jié)果穩(wěn)定，能滿足臨床應用的要求；通過線性范圍的驗證發(fā)現(xiàn)儀器在廠家給定的范圍內(nèi)線性良好、能滿足臨床要求；標本的攜帶污染率低，證明該儀器的自動沖洗管道能力強，能夠有效控制交叉污染3；對參考區(qū)間的驗證結(jié)果都在儀器說明書給出的參考范圍內(nèi)。
總之，通過對ARCHITECT—i2000SR全自動免疫分析儀是臨床實驗室較理想儀器。
參考文獻
[1] 鄒麟，張莉萍，夏吉榮，田小浪，.全自動免疫分析儀ARCHITECT i2000檢測HBV血清標志物性能評價[J].重慶醫(yī)學，2010，12，39（24）：3353—3354.
【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒標志物；化學發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附；測定法；對比研究
我國流行性疾病中受到乙肝病毒（HBV）感染的人群占大多數(shù)，據(jù)研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，感染人群中60歲以內(nèi)患者中有8.2%攜帶乙肝表面抗原[1]。自上世紀80年代以來，臨床上普遍使用開展條件要求不高、設備簡單的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）一步法來檢測患者的HBV標志物（HBV-M），但其檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和準確性易受到干擾，很容易在醫(yī)院實驗室檢測引發(fā)糾紛[2]。為了彌補以上不足，醫(yī)療人員逐漸將免疫學檢驗與化學發(fā)光技術(shù)相結(jié)合形成了化學發(fā)光免疫分析法（CLIA），由于具有結(jié)果準確、穩(wěn)定性高、靈敏度高、反應快速、無放射線污染等優(yōu)點，CLIA分析法成為了研究的熱點和趨勢，也越來越受到各大醫(yī)院的重視?，F(xiàn)就我科使用酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）和化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）分別檢測HBV-M的結(jié)果進行分析，并比較二者的優(yōu)缺點及結(jié)果的一致性[2-3]。
1資料與方法
1.1臨床資料310份血清標本都來源于2011年3月――2013年2來我院就診和住院的患者，其中女性患者140例，男性患者170例，最小患者年齡為8歲，年齡最大患者為63歲，平均年齡38±4.3歲。
1.2儀器和試劑使用的儀器：上?？迫AST-360型酶標儀，上海科華ST-36W全自動酶標洗板機，德國羅氏Cobase 411化學發(fā)光分析儀、iWO-960全自動酶標洗板機和ae-Lis全自動加樣器（沒有這兩設備）。ELISA試劑盒中標記酶是HRP（辣根過氧化物酶），底物通常選用鄰苯二胺和四甲基聯(lián)苯胺（上?？迫A生物工程股份有限公司提供）；CLIA法配套試劑由德國羅氏公司提供。
1.3操作方法使用ELISA和CLIA檢測310例患者血清標本時，操作步驟嚴格按說明書操作。按照ELISA試劑盒的說明書要求，每次測定都要設置試劑空白對照，選擇手工加樣方式進行加樣，根據(jù)酶標儀顯示的檢測結(jié)果判定陽性及陰性；CLIA檢測法中采用e-Lisa全自動加樣器加樣，定量檢測HBV-M過程中，若出現(xiàn)一下結(jié)果需要進行復查（設置雙空）：HBsAg、HbeAg和抗-HBs均表現(xiàn)雙陽性，單獨一項呈現(xiàn)出弱陽性、陽性等情況。
1.4數(shù)據(jù)處理使用SPSS17.0軟件包對ELISA和CLIA分別檢測到的兩組數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理，P>0.05時不具有統(tǒng)計學意義。
3討論
20世紀80年代以來，我國大多數(shù)醫(yī)院都以ELISA法檢測HBV-M的結(jié)果作為判斷患者乙肝傳染性的標準之一[2]，因為他采用手工加樣，具有特異性較好、開展條件要求不高、價格低廉等優(yōu)點，點在各大醫(yī)院實驗室廣泛使用[4]。但其檢測容易受到多種因素的影響，而導致結(jié)果穩(wěn)定性較差，易造成假陽性和漏檢，如試劑盒運輸過程溫度、酶的純度以及反應過程很容易受到外界溫度等影響；人工加樣時很容易出現(xiàn)漏加等情況；標本接近臨界值時ELISA檢測試劑或判斷標準、操作等原因產(chǎn)生重復性差的現(xiàn)象，這樣會引發(fā)不必要的實驗室檢測糾紛[1，4]。而CLIA檢測法將免疫學檢驗與化學發(fā)光技術(shù)有效的結(jié)合在了一起，彌補了ELISA檢測法的不足。首先他采用的是自動加樣器，降低了人為因素的干擾；其次他的重復性好、結(jié)果穩(wěn)定性強。經(jīng)ELISA檢測乙肝核心抗體抗-HBc，其陽性率明顯低于CLIA，這可能與檢測方法上的不同有關(guān)；一些樣通過ELISA，檢測為陰性而CLIA檢測結(jié)果表明他們是一些低濃度樣本[2-3]。由此可見，CLIA檢測能有效降低漏檢現(xiàn)象，對于做好早期預防具有重要意義。
綜上所述，由于CLIA檢測具有具有結(jié)果準確、穩(wěn)定性高、靈敏度高、反應快、標準化和自動化等優(yōu)點，同時還彌補了ELISA檢測的不足，應該廣泛地應用到現(xiàn)代臨床診斷中。
參考文獻
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[2]肖琴.酶聯(lián)免疫吸附試驗法和微粒子酶免疫分析法測定乙型肝炎病毒血清標志物的比較研究[J].實用醫(yī)技雜志，2010，（06）：543-544.
呋喃它酮是一種人工合成的硝基呋喃類抗生素，主要用于畜禽和水產(chǎn)動物的各種腸道感染性疾病的治療及促進生長的添加劑，曾經(jīng)在畜禽水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣泛應用。有關(guān)研究證明，呋喃它酮及其代謝物5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮（AMOZ）具有相當大的毒性和副作用，能誘導有機體基因突變及致畸胎，且能誘發(fā)癌癥[1，2]。美國、加拿大、中國和歐盟的很多國家都已規(guī)定動物源性食品中呋喃它酮及其代謝物AMOZ殘留為不得檢出。但是因為其價格低廉、療效好，目前違法使用現(xiàn)象在很多國家仍然存在，故有必要對動物源性食品中呋喃它酮及其代謝物AMOZ加強監(jiān)控[3]。由于呋喃它酮原藥不穩(wěn)定， 進入動物體內(nèi)后會被迅速代謝和分解，對原藥的檢測難度很大，但其代謝物AMOZ可以蛋白結(jié)合物的形式長期、穩(wěn)定存在組織內(nèi)，在適當?shù)乃嵝詶l件下，這些結(jié)合殘留物可以從蛋白質(zhì)中釋放出來，因此通常將AMOZ作為監(jiān)測呋喃它酮的靶化合物[1，4，5]。
目前，AMOZ 檢測方法主要有色譜法[6～9]、免疫分析法[10] 等。色譜法準確、靈敏，但操作復雜、設備昂貴、檢測速度慢，需要專業(yè)技術(shù)人員。而免疫分析法具有簡單、快速、靈敏度較高、特異性強和高通量等優(yōu)點。免疫分析法的關(guān)鍵是高親和力和特異性的抗體的制備，其中基因工程重組單鏈抗體是將天然抗體的重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL通過一條柔軟的連接肽連接成的單鏈分子，不僅具有高親和力和特異性，而且還可以通過工程菌發(fā)酵快速大量制備，極大地降低了抗體生產(chǎn)成本，縮短了抗體生產(chǎn)周期?；瘜W發(fā)光免疫分析是近十年來發(fā)展起來的一項將高靈敏度的化學發(fā)光與高特異的免疫分析相結(jié)合的新興的免疫檢測技術(shù)，具有檢測特異性好、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優(yōu)點，能顯著提高檢測的靈敏度，并且比常用的其他免疫分析法的靈敏度都高[11～14]。迄今為止，文獻報道的AMOZ免疫分析法都是建立在傳統(tǒng)的多克隆或單克隆抗體基礎(chǔ)上的ELISA法，利用重組單鏈抗體建立的AMOZ化學發(fā)光酶免疫分析方法還未見報道。本研究利用重組抗AMOZ衍生物單鏈抗體，建立了測定蝦肉中AMOZ殘留的間接競爭化學發(fā)光酶免疫分析新方法。本方法簡便、快速、準確、儀器設備簡單，靈敏度高于ELISA法，測定結(jié)果和HPLC-MS/MS法測定結(jié)果呈現(xiàn)良好的相關(guān)性。
2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫法；電化學發(fā)光法：甲胎蛋白；結(jié)果對比
作者單位：459000河南省濟源市腫瘤醫(yī)院在健康人群血清中，甲胎蛋白(AFP)的含量較低，一般情況下低于20ng/ml。檢測甲胎蛋白含量，可以為原發(fā)性肝癌提高較為準確的診斷依據(jù)，還可以判斷患者的預后質(zhì)量［1］。酶聯(lián)免疫法(ELISA)作為經(jīng)典的免疫方法，應用于甲胎蛋白的檢測，而電化學發(fā)光法(ECLIA)作為新型檢測方法，具有快速、精確、重復性高等特點，逐漸應用于甲胎蛋白的檢測［2］。本研究中，采用酶聯(lián)免疫法和電化學發(fā)光法，對2012年1月至2012年6月期間采集的60例血清標本，進行甲胎蛋白的檢測，并對兩 種檢測方法的結(jié)果，進行比較和分析?，F(xiàn)將結(jié)果匯報如下，以供臨床參考。
1資料與方法
11一般資料2012年1月至2012年6月期間采集的60例血清標本，其中男32例，女28例，年齡369～695歲。60例血清標本中，33例檢測結(jié)果顯示甲胎蛋白水平處于正常范圍，而另外的27例超出正常范圍。
12檢測試劑、儀器及血樣采集
121酶聯(lián)免疫法嚴格按照試劑盒操作說明書(購自武漢博世德科技責任有限公司)，通過酶標儀，對甲胎蛋白水平進行檢測。
122電化學發(fā)光法采用羅氏Cobase411電化學發(fā)光自動分析儀，對甲胎蛋白水平進行檢測。
13統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS 170統(tǒng)計學軟件，進行分析和處理，計量資料以(均數(shù)±標準差)表示，P
2結(jié)果
通過最小二乘法擬合直線方式，比較酶聯(lián)免疫法(Y)與電化學發(fā)光法(X)檢測結(jié)果，是否具有相關(guān)性，結(jié)果表明酶聯(lián)免疫法與電化學發(fā)光法具有線性關(guān)系，并且具有高度相關(guān)性。首先對兩種檢測方法的甲胎蛋白檢測結(jié)果，進行正態(tài)分布分析，結(jié)果顯示符合正態(tài)分布，然后對均值，進行t檢驗，結(jié)果顯示，在95%的可信區(qū)間，雙尾檢驗的P=02875，表明酶聯(lián)免疫法與電化學發(fā)光法的檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義。
3討論
甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)作為特異性強的原發(fā)性肝癌標志物，主要是由胎兒肝臟組織合成，待胎兒娩出后，甲胎蛋白水平急速下降，待出生后幾個月或者一個年內(nèi)，基本降至正常范圍，使甲胎蛋白水平低于20ng/ml［3］。大多數(shù)原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)的甲胎蛋白水平出現(xiàn)異常升高，轉(zhuǎn)移性肝癌患者體內(nèi)的甲胎蛋白水平也相對較高，但是一般情況下，甲胎蛋白水平不高于350～400IU/ml，而畸胎瘤、急性病毒性肝炎、乙肝病毒攜帶者，以及酒精性肝硬化患者，由于肝臟組織的代償性增生，甲胎蛋白水平也有輕度升高。目前，臨床實驗室檢測甲胎蛋白方法中，以放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、化學發(fā)光法(ECLIA)，以及免疫層析法為主［4］。
化學發(fā)光法(ECLIA)是近年來才發(fā)展起來的新興技術(shù)，作為新型標記免疫分析方法，通過電化學發(fā)光與免疫測定相結(jié)合的方法，對甲胎蛋白水平進行檢測?；瘜W發(fā)光法檢測方法具有檢測速度快、結(jié)果精確、檢測范圍寬、無放射性污染，以及自動化程度高等諸多優(yōu)點，逐漸應用于臨床檢驗中，但是其檢測設備及相應試劑的價格相對比較昂貴，在某種程度上限制了其臨床應用；酶聯(lián)免疫法(ELISA)具有操作簡便、成本低廉等優(yōu)點，被廣泛應用于甲胎蛋白的臨床檢驗中，尤其適合基層醫(yī)院的篩查中，但是其檢測敏感性相對較低、準確性和穩(wěn)定性結(jié)果也不夠理想。所以，兩種方法都存在各自的優(yōu)點，以及相應的局限性，當酶聯(lián)免疫檢測假陽性或者陽性時，可以通過電化學發(fā)光法進行確認。
本研究中，通過最小二乘法擬合直線方式，比較酶聯(lián)免疫法(Y)與電化學發(fā)光法(X)檢測結(jié)果，是否具有相關(guān)性，結(jié)果表明酶聯(lián)免疫法與電化學發(fā)光法具有線性關(guān)系，并且具有高度相關(guān)性。首先對兩種檢測方法的甲胎蛋白檢測結(jié)果，進行正態(tài)分布分析，結(jié)果顯示符合正態(tài)分布，然后對均值，進行t檢驗，結(jié)果顯示，在95%的可信區(qū)間，雙尾檢驗的P=02875，表明酶聯(lián)免疫法與電化學發(fā)光法的檢測結(jié)果差別不大?？偠灾嘎?lián)免疫法與電化學發(fā)光法都能較為準確的反應甲胎蛋白水平，對于腫瘤的診斷和治療的預后，提供重要的理論依據(jù)。但是，本次研究的標本數(shù)量也不是太多，相應的檢測范圍也不夠?qū)?，對于不同檢測系統(tǒng)對檢測結(jié)果的影響方面，還需要進一步的研究和分析。
參考文獻
［1］于廣名 化學發(fā)光法與放射免疫法檢測腫瘤標志物的比較(CA199、CA125、CA153、AFP、CEA) 中國中醫(yī)藥咨詢，2010，8(2)：203203.
［2］楊洋，湯華，浦永，等甲胎蛋白的液相芯片法檢測與方法學評價 網(wǎng)際檢驗醫(yī)學雜志，2009，30(1)：9697.
2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象。所有患者均取晨起空腹靜脈血檢測，初篩試驗采用CLIA法展開特異性梅毒螺旋體抗體試驗，再將標本經(jīng)TPPA與梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）進行復檢。比較不同S/CO值標本TPPA與TRUST復檢結(jié)果。結(jié)果：S/CO值12.00標本符合率分別為91.30%、94.87%、97.14%、96.43%、100%，均明顯高于TRUST的63.04%、69.23%、68.57%、75.00%、77.78%，差異有統(tǒng)計學意義（P
【關(guān)鍵詞】 化學發(fā)光免疫分析法； 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗； 梅毒； 血清學篩查
doi：10.14033/ki.cfmr.2017.15.023 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）15-0042-02
梅毒是一種傳染性較強、病程較長的性傳播疾病，可嚴重損害心血管、神經(jīng)等多系統(tǒng)，對人們健康危害極大，尤其威脅臨床輸血安全[1]。此外，梅毒可通過母嬰傳播這一途徑將梅毒傳染至胎兒，進而造成先天梅毒、自發(fā)性流產(chǎn)。故早期診治梅毒顯得尤為重要。目前臨床常用的檢測方式為血清學篩查，包括酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）、CLIA、TPPA、TRUST等。其中ELISA、CLIA、TPPA屬于特異性梅毒抗體試驗，而TRUST屬于非特異性梅毒抗體試驗[2]。多數(shù)醫(yī)院采用上述其中的兩種方式篩查梅毒，但因選用不同的方式可能導致檢測結(jié)果產(chǎn)生差異。本研究擬用CLIA法聯(lián)合TPPA法進行梅毒血清學篩查，探討其臨床應用價值，為梅毒早期診斷提供合理借鑒，現(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇2014年2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象，年齡23～70歲，平均（36.84±3.26）歲。
1.2 儀器與設備
微量U形反應板、平板混合器、微量滴管（25 μl/滴）、微量加樣器（25 μl）。CLIA法采用Chem cline全自動化學發(fā)光儀，應用北京科美生物技術(shù)有限公司提供的配套試劑盒。TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供，包括血清稀釋液、陽性對照血清、致敏粒子、溶解液等。TRUST試劑購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。
1.3 方法
所有患者均取3 ml晨起空腹狀態(tài)下靜脈血，行離心處理15 min，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，血清分離后，制作血清標本，于4 ℃保存。采用全自動分析儀進行CLIA測試，并讀取結(jié)果。參照實際說明書，S為待測樣品發(fā)光值，陰性對照品平均發(fā)光值的2.1倍為臨界值（CO）。S/CO
1.4 統(tǒng)計學處理
采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用（x±s）表示，計數(shù)資料以率（%）表示，比較用字2檢驗，P
2 結(jié)果
S/CO值12.00標本符合率均明顯高于TRUST，差異有統(tǒng)計學意義（P
3 討論
梅毒是由蒼白密螺旋體感染導致的性傳播疾病，其病原體可累及全身所有臟器，引起多器官病變、破壞組織，從而導致功能失常。近年來，隨著人們行為觀念及生活方式的變化，梅毒發(fā)病率呈明顯上升趨勢，逐漸引起臨床重點關(guān)注[3]。由于梅毒螺旋體僅存在于人體內(nèi)，故人是唯一的梅毒傳染源。文獻[4]顯示，95%～98%左右的患者是通過性接觸而感染，梅毒螺旋體通過穿透人體正常皮膚及黏膜，從而使健康者感染梅毒?；颊呷旧厦范竞笃湫难芟到y(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)嚴重受損，生命安全受到威脅，同時該病具有較強的傳染性，因而積極防治梅毒對維護社會公共衛(wèi)生安全具有重要意義。
傳統(tǒng)上梅毒篩查方式主要有兩種，一是初篩以特異性梅毒螺旋體試驗，復檢應用非特異性梅毒螺旋體試驗；另外一種方式中初篩與復檢分別應用非特異性與特異性梅毒螺旋體試驗。在梅毒血清學篩查中，較高的敏感度是對檢查方式的重點要求，目前，CLIA是梅毒初篩試驗中應用較為普遍的一種方式，制備梅毒螺旋體抗原，并以辣根過氧化物酶進行標記，與標本中抗體形成雙抗原夾心后，洗滌添加化學發(fā)光底物，發(fā)光強度測定后，依據(jù)S/CO值判斷標本有無梅毒螺旋體特異性抗體[5]。由于整個檢測過程中采用全自動分析儀讀取結(jié)果，從而充分發(fā)揮高自動化的優(yōu)勢，減少認為誤差，并避免攜帶污染。故該檢測方法能夠?qū)Υ笈繕吮具M行篩查。但因其敏感度較高，在檢測低S/CO值標本時易發(fā)生假陽性現(xiàn)象，進而造成誤診，增加臨床確診難度[6]。本研究中，46例S/CO值為1.00～2.99患者中，經(jīng)TPPA確證為陰性4例，而TRUST復檢出17例陰性。該標本多來自腫瘤或透析患者，因此，針對S/CO值較低的患者需謹慎處理，并采用TPPA進行確證，減少假陽性的存在。另外，在CLIA初篩后，TPPA復檢符合率為96.00%，明顯高于TRUST的74.50%，表明TPPA聯(lián)合CLIA檢測梅毒可有效提高檢測準確度，減少漏診、誤診現(xiàn)象。這是由于TPPA采用人工載體明膠粒子與梅毒螺旋體抗體形成凝集，發(fā)生粒子凝聚反應，進而有效檢測出血清中梅毒螺旋體抗體，其靈敏度與特異度均具有較高水平。而本研究中CLIA檢出率高于TPPA，可能是由藥物干擾所致，或是梅毒螺旋體隱性感染。TRUST作為非特異性梅毒螺旋w，可通過觀察滴度的變化，以判斷梅毒感染情況。但在復檢試驗中發(fā)現(xiàn)，陽性率偏低，存在漏診率高等問題。故本研究認為，CLIA聯(lián)合TPPA檢測梅毒更具臨床應用價值。但需注意的是，TPPA法在實際操作過程中存在檢測時間長、操作繁雜、自動化水平低等問題，判讀結(jié)果時易受人為因素影響，尤其是標本介于陽性與陰性之間，難免出現(xiàn)誤差[7]。而CLIA能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、高自動化、重復性檢測，客觀的判讀結(jié)果，敏感度更高，故更適合應用于初篩試驗[8]。由于各檢測方式均存在一定的漏診、誤診現(xiàn)象，臨床實際篩查中應注重采用聯(lián)合的方式進行檢測，尤其是對于S/CO值較低的標本，經(jīng)CLIA法初篩后，應給予TPPA法確證，以確保檢測準確度，盡可能的減少誤診、漏診現(xiàn)象，從而避免醫(yī)療糾紛，構(gòu)建和諧的醫(yī)患關(guān)系。
綜上所述，CLIA聯(lián)合TPPA法在梅毒血清學篩查中具有顯著的應用價值，臨床可充分發(fā)揮CLIA敏感度高的優(yōu)勢，在初篩后應用TPPA法對檢測結(jié)果進行確證，提高診斷準確度，為臨床治療提供科學依據(jù)。
參考文獻
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[4]牛奇山，張柏梁.明膠顆粒凝集試驗與微粒子化學發(fā)光免疫分析法檢測梅毒螺旋體[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35（4）：493-494.
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化學發(fā)光免疫分析包括三大類型: 即標記化學發(fā)光物質(zhì)的化學發(fā)光免疫分析、 標記熒光物質(zhì)的熒光化學發(fā)光免疫分析和標記酶的化學發(fā)光酶聯(lián)免疫分析。化學發(fā)光免疫分析技術(shù)可測定內(nèi)分泌激素、 腫瘤標志物、 血藥濃度、 傳染病和心血管疾病標志物、 貧血及過敏原等項目［1］。目前對運動員血清睪酮的檢測， 大多采用放射免疫法， 由于其自動化程度低， 不適用于快速檢測， 又有放射污染。美國Beckman．Coulter公司和法國Pasture研究院合作生產(chǎn)的Access全自動微粒子化學發(fā)光免疫分析儀， 其方法學具有高靈敏性、 高精確性、 高穩(wěn)定性等特點， 無需對樣本進行測前處理， 簡便的自動化操作， 全程僅需15～20 min， 且無放射污染。本室引進Access免疫分析系統(tǒng)對運動員血清T進行定量測定， 現(xiàn)對該方法的臨床應用評價如下。
1 材料和方法
1.1 檢測對象 無錫市體育管理中心運動員122人， 年齡≥15歲， 其中男64人， 女58人。對照組為來我院正常體檢的中學生， 男、 女各30人。采運動員清晨靜脈血2 mL， 分離血清后進行檢測。
1.2 材料 血清睪酮的檢測采用Access磁微?；瘜W發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。Access免疫分析系統(tǒng)及配套的T試劑盒， 沖洗緩沖液， 堿性液， 酸性液， 定標液， 基質(zhì)液(Substrste)， 反應杯(RV管)由BeckmanCoulter公司提供。
1.3 方法
1.3.1 標準曲線 分別取0、 1.7、 5.2、 13.9、 27.8、 55.5 nmol/L T標準液， 在Access免疫分析系統(tǒng)中執(zhí)行自動定標程序。以2次測定結(jié)果的均值， 進行數(shù)學邏輯處理， 繪制標準曲線。
1.3.2 統(tǒng)計學分析 兩組間數(shù)據(jù)采用t檢驗。
2 結(jié)果
2.1 精密度測試 取低、 中、 高值的混合血清分別重復測定20次， 計算變異系數(shù)CV， 反映批內(nèi)精密度。每天對不同濃度的質(zhì)控血清測定1次， 連續(xù)20 d， 評價批間精密度。低、 中、 高值批內(nèi)CV分別為4.1、 2.7、 1.6; 批間CV 分別為4.4、 3.2、 2.6。
2.2 血清睪酮檢測結(jié)果及統(tǒng)計分析 運動員血清睪酮檢測結(jié)果顯示， 男女運動員與各自相同性別正常人對照組之間無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 表1 運動員血清睪酮檢測
3 討論
Access免疫分析通過在RV管中加入包被單克隆抗體的磁性微粒、 血清樣品、 堿性磷酸酶(ALP)標記的抗原， 經(jīng)37℃孵育后， 形成競爭法抗原抗體結(jié)合成的復合物。再加入底物 AMPDD(一種金剛基二螺［4， 4］二氧乙烷的磷酸脂)發(fā)光劑。AMPDD經(jīng)ALP水解， 生成一種不穩(wěn)定的陰離子， 該陰離子分解時持續(xù)發(fā)光， 且與ALP量成正比， 通過測定相對發(fā)光單位(relative light unit， RLU)定量檢測血清中物質(zhì)的濃度［2］。
對運動員血清T檢測結(jié)果表明， CV％值較小， 說明儀器重復性較好， 測定結(jié)果穩(wěn)定。 T的測定濃度范圍在0～55.5 nmol/L之間， 能夠滿足運動員正常測試的需要。自動化的Access免疫分析系統(tǒng)， 既具有化學發(fā)光檢測的高靈敏度， 又具有免疫分析的高特異性， 準確性、 穩(wěn)定性， 能夠快速及時的為運動員訓練監(jiān)控提供可靠的依據(jù)。另外， 它是用化學試劑來標記抗原或抗體， 避免了因使用放射性核素而帶來的對人體和環(huán)境的危害。
但由于試劑成本的原因， Access免疫分析系統(tǒng)仍未廣泛應用于臨床。隨著臨床需求的進一步擴展， 高靈敏度、 寬線性Access免疫分析系統(tǒng)的將得到廣泛應用。
參考文獻
